许多生物学实验都需要使用缓冲液来维持有效的pH，这很重要，因为蛋白质和酶对pH的变化敏感，因此为当前和下游实验选择正确的缓冲液至关重要。在本文中，我将简要讨论HEPES和PIPES在配置及使用过程中要考虑的一些重要因素，希望能对大家有所帮助。
如何制作HEPES及使用注意事项
HEPES是两性离子Good's缓冲液，在6.8至8.2的pH范围内有效。这使HEPES在生理pH值下成为有效的缓冲液。该缓冲液可用于多种生物的细胞培养基中。它也可用作蛋白质研究中的结合缓冲液，用于阳离子交换洗脱实验中，以及在凝胶电泳中用作运行缓冲液。
HEPES的制备步骤：
要制备1升1M HEPES缓冲溶液，请将238.30 g GoldBio HEPES溶解 在750 mL dH 2 O中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH。您可以在1M HEPES PDF协议中使用一张表。用dH 2 O填充至终体积1L，并通过过滤器或高压釜灭菌。将缓冲液储存在4℃。如果您使用的是HEPES钠盐，请改用HEPES-Na方案。
注意事项：
HEPES可溶于水，价格便宜，并且通常具有生物惰性。但是，它确实参与了产生自由基的氧化还原反应，并干扰了DNA和限制性内切酶之间的反应，但是由于空间位阻，其干扰程度小于Tris。同样重要的是要注意，当使用异质连接蛋白通道时，不应使用HEPES，因为它会抑制其功能。如果要进行毒性研究，请选择HEPES钠盐而不是游离酸。
如何制作PIPES及使用注意事项
PIPES是哌嗪缓冲液家族的一员，与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液，在6.1至7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同，PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。该缓冲剂不会与金属络合，因此可用于含金属离子的溶液。它也可以用于色谱分析，电子显微镜固定植物细胞，以及代替草甘膦缓冲液。
PIPES的制备步骤：
要制备1升1M PIPES游离酸缓冲溶液，请将302.37g PIPES游离酸添加到600 mL dH 2 O中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH值。您可以在1M PIPES PDF协议中使用一个表。用dH 2 O填充至终体积1L，并使用过滤器或高压灭菌器灭菌。储存在4˚C。如果您使用的是PIPES钠盐，请改用1M PIPES-Na PDF协议。
注意事项：
直到溶液的pH值升高到6.5以上时，PIPES的游离酸才容易溶解，但是PIPES的钠盐很容易溶解。如果使用的是游离酸形式的缓冲液，请使用氢氧化钠将其转化为钠盐，以提高在较低pH下的溶解度。像HEPES一样，PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验，因为它会导致自由基的形成。